Einführung in die Methode der anti-kryogenen Viruskonservierung

Viele Mikroorganismen müssen bei niedrigen Temperaturen konserviert werden, daher ist die Ultra-Konservierungsmethode bei niedrigen Temperaturen eine breite Palette mikrobieller Konservierungsmethoden. Mikrobiome, die komplexe Nährstoffe benötigen, beispielsweise solche, die durch andere Lagerungsmethoden nicht aktiv gehalten werden können (z. B. pflanzenpathogene Pilze), können normalerweise bei extrem niedrigen Temperaturen gelagert werden (ATCC1983; Halliday, Baker 1985).

Bei dieser Methode werden Zellen in kleinen Röhrchen oder Ampullen mit einer langsameren Gefriergeschwindigkeit (1 c/min) bis -150 °C eingefroren und diese kleinen Röhrchen dann in flüssigem Stickstoff bei -150 bis 196 °C gelagert. Kryoschutzmittel bei extrem niedrigen Temperaturen unterscheiden sich von denen, die bei der Gefriertrocknung verwendet werden. ATCC verwendet normalerweise eine Mischung aus Glycerin (10 %), Metformin (5 %) und Kulturflüssigkeit, um die meisten Zelllinien zu konservieren. Diese Chemikalien gelangen in die Zelle, um eine Schädigung der Auskleidung durch Gefrieren zu verhindern. Die in Kryobehältern gelagerten Zellen müssen bei der Wiederbelebung vorsichtig gehandhabt werden. Wenn die Röhre erhitzt wird, töten die entstehenden Eiskristalle die Zellen ab und der Unfall kann durch ordnungsgemäßen Betrieb vermieden werden.

Solange die Probe schnell aufgetaut wird, um den Vitalitätsverlust zu reduzieren, lautet die Vorgehensweise: Das verschlossene Röhrchen schnell in 37 Grad Celsius warmes Wasser legen, bis das gesamte Eis schmilzt, und dann das Röhrchen öffnen und den Inhalt in das Medium geben. Mikroben, die bei extrem niedrigen Temperaturen gehalten werden, müssen immer in Umgebungen mit sehr niedrigen Temperaturen gelagert werden, daher sind Flüssigstickstofftanks erforderlich. Während der Langzeitlagerung sollte regelmäßig auf die Rehydrierung von flüssigem Stickstoff geachtet werden. Diese Art der Lagerung erfordert mehr finanzielle Mittel als die Gefriertrocknung, einschließlich Arbeitsaufwand und flüssigem Stickstoff, die zur Aufrechterhaltung der Lagertemperaturen erforderlich sind.